操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
植物谷胱甘肽（GLUTATHIONE）總濃度熒光定量檢測試劑盒50次扁桃酸

細胞還原型谷胱甘肽（GSH）濃度熒光定量檢測試劑盒50次氧化鋁H

血液還原型谷胱甘肽（GSH）濃度熒光定量檢測試劑盒50次1，4-雙（5-苯基-2-惡唑）苯

組織還原型谷胱甘肽（GSH）濃度熒光定量檢測試劑盒50次氟化鈰

體液還原型谷胱甘肽（GSH）濃度熒光定量檢測試劑盒50次人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ（TNFsR-Ⅱ）ELISA試劑盒,

植物還原型谷胱甘肽（GSH）濃度熒光定量檢測試劑盒50次人抗IVIgG抗體ELISA試劑盒,

細胞氧化型谷胱甘肽（GSSG）濃度熒光定量檢測試劑盒50次人綠膿桿菌外素A（PEA）ELISA試劑盒,PEA ELISA KIT

血液氧化型谷胱甘肽（GSSG）濃度熒光定量檢測試劑盒50次人白三烯C4（LTC4）ELISA試劑盒,LTC4 ELISA

組織氧化型谷胱甘肽（GSSG）濃度熒光定量檢測試劑盒50次小鼠糖原磷酸化酶同工酶II（GP-II）ELISA試劑盒,

體液氧化型谷胱甘肽（GSSG）濃度熒光定量檢測試劑盒50次大鼠脫氫表雄酮硫酸酯（DHEA-S）ELISA試劑盒,

植物氧化型谷胱甘肽（GSSG）濃度熒光定量檢測試劑盒50次特價坂崎桿菌顯色培養(yǎng)基

細胞還原型谷胱甘肽（GSH）濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒50次植 物（大豆）蛋白胨   培養(yǎng)基原材料，含碳水化合物，提供生長氮源

血液還原型谷胱甘肽（GSH）濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒50次3 .5%NaCl甘露醇

組織還原型谷胱甘肽（GSH）濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒50次遼東楤木皂苷V 3-O-[β-D-glucopyranosyl（1→2）]-[ β-D-gluco

體液還原型谷胱甘肽（GSH）濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒50次脫氧核糖核酸（鯡魚精）
戊型肝炎病毒RT-PCR試劑盒P2Y1R/P2ry1  P2Y1受體抗體N,N'-二環(huán)己基-4-嗎啉脒 98%

P2Y4R/P2Ry4  P2Y4受體抗體DNA酶 ≥300 Kunitz units/mg protein

P311 protein  神經再生相關蛋白抗體3,3'-二氨基聯(lián)苯 99%

p38MAPK/MAPK14  絲裂原活化蛋白激酶p38抗體3,3'-二氨基聯(lián)苯 97%

phospho-p38(Thr180/Tyr182)  磷酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體2,7-二溴芴酮 96%

phospho-p38 MAPK/MAPK14 (Thr180/Tyr182)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗體2,6-二氯酚靛鈉鹽 AR

MKK3  絲裂原活化蛋白激酶MKK3抗體3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉 99%

Phospho-MKK3 (Ser189)/MKK6 (Ser207)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗體 3,3'-二氨基聯(lián)苯四鹽酸鹽水合物 98%