產(chǎn)品名稱：小鼠肺癌細胞
來源：肺腺癌；雌性；C57BL/ICRF-a(t)

培養(yǎng)基：DMEM

狀態(tài)：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

辛夷（望春花）（標準品）英文名稱： L-Glutamic acid 5-methyl ester鐵調(diào)節(jié)蛋白25抗體包裝100g

辛夷脂素(標準品)英文名稱： N-Acetyl-L-leucineHD域內(nèi)含蛋白2抗體包裝25g

新補骨脂異黃酮(標準品)英文名稱： L-Orn(Z)-OH艾滋病病p55抗體包裝5g

新橙皮苷(標準品)英文名稱： N-Acetyl-L-phenylalanine造血激酶抗體包裝1g

新橙皮苷二氫查爾酮(標準品)英文名稱： L-ProlinamideHEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白5B蛋白抗體包裝25g

新穿心蓮內(nèi)酯（標準品）英文名稱： N-6-Trifluoroacetyl-L-lysine缺氧誘導(dǎo)基因1B蛋白抗體包裝5g

新地奧斯明英文名稱： O-Benzyl-L-serine乙?；M蛋白H4抗體包裝1g

新綠原酸(標準品)英文名稱： O-tert-Butyl-L-serine 熱休克蛋白B2抗體包裝5g

新芒果苷(標準品)英文名稱： CAL-101 (GS-1101)人類白抗原B27包裝25MG

新藤黃酸(標準品)英文名稱： O-tert-Butyl-L-threonine螺旋環(huán)螺旋轉(zhuǎn)錄因子HATH6抗體包裝25g

新烏頭原堿（標準品）英文名稱： L-dopa,Levodopa神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β2抗體包裝5g

杏葉防風(fēng)（標準品）英文名稱： L-dopaHDHD3蛋白抗體包裝1g

雄蠶蛾（家蠶）（標準品）英文名稱： L-a-Aminoadipic acidHEATR3蛋白抗體包裝5g

熊膽粉（標準品）英文名稱： L-Cyclopropylalanine癌增強蛋白抗體包裝1g

熊果苷（標準品）英文名稱： L-Homophenylalanine單基組蛋白H3K9抗體包裝25g
CMT167細胞雞樅(雞菌）Human MASP1(Mannan-binding lectin serine protease 1) ELISA KitAlias: MASP1|Mannan-bindinglectinserineprotease1|Serineprotease5|Ra-reactivefactorserineproteasep100|RaRF|Mannose-bindingprotein-associatedserineprotease|Mannose-bindinglectin-associatedserineprotease1|MASP-1|ComplementfactorMASP-3|Complement-activatingcomponentofRa-reactivefactor|CRARF|CRARF1|PRSS5|ELISAKitReactivity: Human

假單胞菌屬Human LSS(Lanosterol synthase) ELISA KitAlias: LSS|Lanosterolsynthase|2|3-epoxysqualene--lanosterolcyclase|Oxidosqualene--lanosterolcyclase|OSC|hOSCELISAKitReactivity: Human

糙孢籃狀菌Human IDE(Insulin-degrading enzyme) ELISA KitAlias: IDE|Insulin-degradingenzyme|Abeta-degradingprotease|Insulinprotease|Insulinase|InsulysinELISAKitReactivity: Human

科赫芽胞桿菌Human IFI16(Gamma-interferon-inducible protein 16) ELISA KitAlias: IFI16|amma-interferon-inducibleprotein16|Ifi-16|Interferon-induciblemyeloiddifferentiationtranscriptionalactivator|IFNGIP1|PYHIN2ELISAKitReactivity: Human

平菇Human KLK7(Kallikrein-7) ELISA KitAlias: KLK7|Kallikrein-7|hK7|Serineprotease6|StRatumcorneumchymotrypticenzyme|hSCCE|PRSS6|SCCE|kallikrein7|chymotryptic|stRatumcorneum|signalprotein|protease|serine|6ELISAKitReactivity: Human

釀酒酵母Human FPR2(N-formyl peptide receptor 2) ELISA KitAlias: FPR2|N-formylpeptidereceptor2|RFP|LipoxinA4receptor|LXA4receptor|HM63|FMLP-relatedreceptorI|FMLP-R-I|Formylpeptidereceptor-like1|FPRH1|FPRL1|LXA4RELISAKitReactivity: Human

米川黃桿菌Human ACAN(Aggrecan core protein) ELISA KitAlias: ACAN|Aggrecancoreprotein|Cartilage-specificproteoglycancoreprotein|CSPCP|Chondroitinsulfateproteoglycancoreprotein1|Chondroitinsulfateproteoglycan1|AGC1|CSPG1|MSK16|AGCAN|CSPGCP|SEDKELISAKitReactivity: Human

白淺灰鏈霉菌Human 12-HETE(12-Hydroxyeicosatetraenoic Acid) ELISA KitAlias: 12-HETE(12-HydroxyeicosatetraenoicAcid)ELISAKitReactivity: Human